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弱碱性树脂操作的基本步骤,我们分八步来讲解

 发布时间:2020-08-11    点击量:573
   弱碱性树脂操作的基本步骤,我们分八步来讲解
  1、树脂的选择
  当目的物具有较强的碱性或酸性时口腔诊所废水处理设备厂家,宜选用弱酸或弱碱性的树脂,这样有助于提高选择性并便于洗脱。如目的物是弱酸性或弱碱性的小分子物质,往往选用强碱或强酸树脂。对于大多数蛋白质、酶和其他生物大分子的分离多采用弱酸或弱碱性树脂,以减少生物大分子的变性,有利于洗脱,并提高选择性。
  2、层析柱
  离子交换层析要根据分离的样品量选择合适的层析柱,离子交换用的层析柱一般粗而短,不宜过长。直径和柱长比一般为1:10~1:50之间,层析柱安装要垂直。装柱时要均匀平整,不能有气泡。
  3、装柱
  先把柱内装满起始缓冲液,用玻璃棒挤压海绵,赶尽气泡并把柱子垂直固定。将交换剂用起始缓冲液调稀搅匀后加入,柱内的交换剂应非常均匀地分布,不应出现节面和气泡,不能干柱,床面要平整,床高距柱顶2~3cm为宜。
  4、平衡缓冲液
  平衡缓冲液是指装柱后及上样后用于平衡离子交换柱的缓冲液。平衡缓冲液的离子强度和pH值的选择首先要保证各个待分离物质如蛋白质的稳定。其次是要使各个待分离物质与离子交换剂有适当的结合,并尽量使待分离样品和杂质与离子交换剂的结合有较大的差别。
  5、上样
  离子交换层析的上样时应注意样品液的离子强度和pH值,上样量也不宜过大,一般为柱床体积的1%-5%(体积分数)为宜,以使样品能吸附在层析柱的上层,得到较好的分离效果。将柱中的缓冲液逐渐放出,使顶部液面达到近于柱床面时开始加样。用注射器或细长的玻管沿柱壁绕环加入酶样,待样液达一定高度后再在柱中间小心加样。
  6、洗脱缓冲液
  在离子交换层析中一般常用梯度洗脱,通常有改变离子强度和改变pH值两种方式。改变离子强度通常是在洗脱过程中逐步增大离子强度,从而使与离子交换剂结合的各个组分被洗脱下来;而改变pH值的洗脱,对于阳离子交换剂一般是pH值从低到高洗脱,阴离子交换剂一般是pH值从高到低。
  7、洗脱速度
  洗脱液的流速也会影响离子交换层析分离效果,洗脱速度通常要保持恒定。一般来说洗脱速度慢比快的分辨率要好,但洗脱速度过慢会造成分离时间长、样品扩散、谱峰变宽、分辨率降低等副作用,所以要根据实际情况选择合适的洗脱速度。
  8、样品的浓缩、脱盐
  离子交换层析得到的样品往往盐的质量分数较高,而且体积较大,样品质量分数较低。所以一般离子交换层析得到的样品要进行浓缩、脱盐处理。另外在层析分离过程中还要注意操作手段和溶液环境,如温度、压力和缓冲系统对欲分离物质稳定性的影响,避免被分离物质失活。
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